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總一氧化氮檢測試劑盒

產品簡介：

總一氧化氮檢測試劑盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸鹽還原酶(Nitrate reductase)還原硝酸鹽(nitrate)為亞硝酸鹽(nitrite)，然后通過經典的Griess reagent檢測亞硝酸鹽，從而測定出總一氧化氮。一氧化氮本身極不穩定，在細胞內很快代謝為硝酸鹽(Nitrate)和亞硝酸鹽(Nitrite)，通過上述方法檢測出硝酸鹽和亞硝酸鹽的總量，就可以推算出總的一氧化氮的量。

本試劑盒采用了NADPH依賴性硝酸鹽還原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。高濃度的NADPH會干擾后續的檢測，消除NADPH的一種常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。本試劑盒采用了LDH清除NADPH的方法，使檢測結果更加準確。

對亞硝酸鹽的檢測下限達到2微摩爾/升，在2-80微摩爾/升的范圍內有很好的線性關系。濃度過高的樣品可以適當稀釋后再進行檢測。

樣品范圍廣，可以檢測細胞裂解液、組織裂解液、細胞或組織的培養液、血清、血漿或尿液等中一氧化氮的含量。酚紅和10%血清對測定無明顯干擾。

樣品需要量少。根據樣品中一氧化氮的濃度不同，僅需0-60微升樣品。 檢測速度快，僅需約80分鐘即可完成檢測。

本試劑盒采用了間接的一氧化氮檢測方法，如需檢測細胞內實際的一氧化氮水平一氧化氮含量，可以采用碧云天生產的DAF-FM DA (NO熒光探針)(S0019)。

保存條件：

-20℃保存一氧化氮含量，一年有效。NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。NADPH配制成溶液后必須分裝并-70℃保存。

注意事項：

RPMI 1640等含有較高濃度硝酸鹽的培養液容易對本試劑盒的檢測產生干擾，請盡量避免。必需使用RPMI 1640培養液時，在檢測一氧化氮前必需先換成其他適當培養液例如DMEM、MEM、F12等甲醇檢測儀，或換成HBSS或PBS等。

推薦選購碧云天生產的細胞與組織裂解液(一氧化氮檢測用)(S3090)用于細胞或組織樣品的裂解。也可以自行選擇適當方式制備細胞或組織樣品的裂解液用于總一氧化氮的檢測一氧化氮含量，但需注意自行選擇的方式可能會干擾試劑盒檢測時的酶反應而影響檢測效果。檢測細胞或組織的培養液、血清、血漿或尿液中的總一氧化氮含量時有毒氣體報警器，不需要選購S3090。S3090裂解獲得的樣品還可以用于蛋白濃度的檢測以及Western印跡檢測，但需注意S3090中不含蛋白酶和磷酸酯酶抑制劑。 檢測反應必須避光進行。

由于檢測過程中有還原反應，凡是影響還原反應的氧化或還原試劑要注意避免，例如常用的還原劑DTT和巰基乙醇。 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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